INTRODUCCIÓN

El análisis confiable de la masa molar de biomacromoléculas es esencial para el control del proceso de fabricación y la liberación del producto. La cromatografía de exclusión por tamaño con detección de dispersión de luz a múltiples ángulos (SEC-MALS, por sus siglas en inglés) es una técnica que caracteriza macromoléculas brindando la masa molar y la polidispersidad de todas las moléculas en solución y que no requiere estándares de calibración del peso molecular. En el modo de cromatografía, cuando se utiliza conjuntamente un instrumento de dispersión de luz con una técnica de fraccionamiento, así como con detectores de concentración [p. ej., UV, índice de refracción (RI, por sus siglas en inglés)], se pueden medir directamente la masa molar absoluta y las distribuciones del tamaño. Un rayo láser se dirige a las moléculas en elución y la luz dispersa resultante es directamente proporcional al producto de la masa molar y la concentración. En este capítulo, se describe un método validado de SEC-MALS para determinar la masa molar de los polisacáridos usados para fabricar vacunas de uso humano. Cabe precisar que, el procedimiento presentado en este capítulo puede ser adaptado para polisacáridos activados y/o derivatizados y para conjugados de proteína-polisacárido monovalente con algunas modificaciones menores dependiendo de las propiedades de la muestra (p. ej., grupos funcionales o diferencias en la composición de la solución entre las muestras y las fases móviles).